1、前言
藥品檢驗實驗室通常包含理化實驗室和微生物實驗室兩部分；理化實驗室運用物理、化學(xué)的方法對生產(chǎn)用的原輔料、包裝材料、中間體及成品等進(jìn)行鑒別、含量測定等分析和檢驗，其結(jié)果作為檢品是否符合法定要求和企業(yè)內(nèi)部質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的依據(jù)。
微生物實驗室一般具有以下功能：
①按《中國藥典》[1]要求，進(jìn)行微生物檢驗方法的驗證、無菌檢查、微生物限度檢查、抗生素效價的微生物檢定、青霉素酶及其活力測定。
②按現(xiàn)行《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》的要求，對醫(yī)藥工業(yè)潔凈室的潔凈度進(jìn)行微生物測定，對無菌生產(chǎn)區(qū)環(huán)境日常動態(tài)監(jiān)測以及生產(chǎn)過程中其他需要進(jìn)行微生物檢測的地方，如對無菌過濾器的驗證、環(huán)境及設(shè)備消毒效果的驗證、滅菌效果的驗證、無菌藥品包裝密封性驗證中微生物挑戰(zhàn)性試驗等。
③細(xì)菌內(nèi)毒素檢查、注射劑的不溶性微粒檢查，這類檢查雖不是檢查微生物，但它們對檢查環(huán)境有較高的要求，通常設(shè)在微生物實驗室。
2、微生物實驗室設(shè)計的有關(guān)要求
《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》[2]要求藥品生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)負(fù)責(zé)藥品生產(chǎn)全過程的質(zhì)量管理和檢驗，并配備與藥品生產(chǎn)規(guī)模、品種、檢驗要求相適應(yīng)的人員、場所、儀器、設(shè)備。在進(jìn)行微生物實驗室的設(shè)計時，應(yīng)了解檢驗流程、過程性質(zhì)、有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范的規(guī)定等，結(jié)合藥品生產(chǎn)企業(yè)生產(chǎn)品種、檢驗工作量的大小合理布置相應(yīng)的微生物檢驗功能間。
在藥品的微生物學(xué)檢驗中，為了保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確、可靠，針對微生物學(xué)檢驗產(chǎn)生影響的幾種因素需要采取相應(yīng)的措施，通常為以下幾種：
①藥品本身的抑菌性或藥品中防腐劑的抑菌性。它們會掩蓋無菌藥品已受污染的事實或造成低于實際污染水平的菌檢結(jié)果。通常采用生長比較法，在實際檢驗條件下，通過比較對照接種試驗菌或陽性菌在有無供試品的狀態(tài)下的生長情況，來驗證供試品在該檢驗方法下的抑菌性。
②標(biāo)準(zhǔn)菌種（試驗菌或陽性菌）制備與傳代、種類及生長狀態(tài)需符合現(xiàn)行《中國藥典》要求。
③培養(yǎng)基的促菌生長能力：培養(yǎng)基應(yīng)具備廣譜性，有助于檢品中所有存活微生物的生長。通過接種不同試驗菌并觀察它們的生長狀態(tài)，進(jìn)行培養(yǎng)基靈敏度驗證試驗。
④檢驗器具，如過濾系統(tǒng)的濾器、濾膜性質(zhì)、材質(zhì)等性能，淋洗液、稀釋劑、培養(yǎng)基的無菌性及操作程序等，通常進(jìn)行陰性對照試驗來檢驗其影響。
⑤培養(yǎng)條件（溫度、濕度及需氧或厭氧）及檢測環(huán)境應(yīng)符合相關(guān)要求。
2.1無菌檢查實驗室
2.1.1用途
用于檢查藥典要求無菌的藥品、醫(yī)療器具、原料、輔料及其他品種是否無菌。
2.1.2《中國藥典》對無菌檢查實驗室要求
無菌檢查應(yīng)在環(huán)境潔凈度10 000級下的局部潔凈度100級的單向流空氣區(qū)域內(nèi)或隔離系統(tǒng)中進(jìn)行，其全過程必須嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作，防止微生物污染。單向流空氣區(qū)、工作臺面及環(huán)境應(yīng)定期按《醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測試方法》的現(xiàn)行國家標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行潔凈度驗證。隔離系統(tǒng)按相關(guān)的要求進(jìn)行驗證，其內(nèi)部環(huán)境的潔凈度須符合無菌檢查的要求。
2.2微生物限度檢查實驗室
2.2.1用途
用于檢查非規(guī)定滅菌制劑及其原料、輔料受微生物污染的程度。檢查項目包括細(xì)菌數(shù)、霉菌數(shù)、酵母菌數(shù)及控制菌檢查。
2.2.2《中國藥典》
對微生物限度檢查實驗室的要求
微生物限度檢查應(yīng)在環(huán)境潔凈度10 000級下的局部潔凈度100級的單向流空氣區(qū)域內(nèi)進(jìn)行。檢驗全過程必須嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作，防止再污染。單向流空氣區(qū)域、工作臺面及環(huán)境應(yīng)定期按《醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測試方法》的現(xiàn)行國家標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行潔凈度驗證。
2.3抗生素效價的微生物檢定室
2.3.1用途
在適宜條件下，根據(jù)量反應(yīng)平行線原理設(shè)計，通過檢測抗生素對微生物的抑制作用，計算抗生素活性（效價）。
2.3.2《中國藥典》[1]對抗生素效價的微生物檢定室的環(huán)境潔凈度未有明確規(guī)定要求
在國家食品藥品監(jiān)督管理局2000年9月頒發(fā)的《藥品檢驗所實驗室質(zhì)量管理規(guī)范（試行）》中第十八條中規(guī)定有“抗生素微生物檢定實驗室分為半無菌操作間和緩沖間。半無菌操作間設(shè)有紫外線燈，操作臺宜穩(wěn)固，并保持水平。實驗室內(nèi)應(yīng)光線明亮，并有控制溫度、濕度的設(shè)備”。通常按潔凈度100 000級設(shè)計。
抗生素效價的微生物檢定實驗所用燒杯、漏斗、移液管、容量瓶、滴管、小鋼管等器皿應(yīng)與其他器皿分開洗滌，檢定用平板與其他培養(yǎng)基平板也應(yīng)分開洗滌，防止抗生素對其他微生物培養(yǎng)的污染。
2.4細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用室
2.4.1用途
利用鱟試劑來檢測或量化由革蘭陰性菌產(chǎn)生的細(xì)菌內(nèi)毒素，以判斷供試品中細(xì)菌內(nèi)毒素的*是否符合規(guī)定。適用于某些不能用家兔進(jìn)行熱原檢測的品種，如放射性藥劑腫瘤抑制劑等，因為這些制劑具有細(xì)胞毒性而有一定的生物效應(yīng)。目前一般認(rèn)為特別適用于生產(chǎn)過程中的熱原控制，因為該檢查法操作簡單，實驗費用少，結(jié)果迅速可得。但該檢查法對革蘭陰性菌以外的內(nèi)毒素不夠敏感，故尚不能代替家兔熱原法。
2.4.2《中國藥典》中要求
進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素含量測定試驗所用的器皿需經(jīng)處理，以去除可能存在的外源性內(nèi)毒素，試驗操作過程應(yīng)防止微生物的污染，在清凈環(huán)境中進(jìn)行，在層流工作臺內(nèi)操作。實驗前，須用肥皂洗手，用75%乙醇（用叔丁醇代替乙醇）棉球消毒。但《中國藥典》中未對細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用室的環(huán)境潔凈度明確規(guī)定要求。一般來說細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用室為半無菌操作間：室內(nèi)設(shè)滅菌紫外燈，潔凈度要求一般為100000級。也有一些藥廠為了節(jié)省能耗而將其設(shè)置為一般環(huán)境。
2.5不溶性微粒檢查用室
2.5.1用途
在可見異物檢查符合規(guī)定后，用以檢查溶液型靜脈用注射劑中不溶性微粒的大小和數(shù)量。
2.5.2《中國藥典》[1]要求
試驗操作環(huán)境應(yīng)不得引入微粒，測定前的操作應(yīng)在層流凈化臺下進(jìn)行。玻璃儀器和其他所需的用品應(yīng)潔凈無微粒，本法所用微粒檢查用水（或溶劑）使用前須經(jīng)不大于1.0 um的微孔濾膜濾過。
2.5.3因《中國藥典》要求注射用水須進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素檢測，因此溶液型靜脈用注射劑的不溶性微粒檢查可與細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用室設(shè)成一間，不用專設(shè)一室，配置相應(yīng)的層流凈化臺。
3、相關(guān)問題及案例
3.1陽性接種室
（1）微生物檢驗離不開對標(biāo)準(zhǔn)菌種及所檢測的菌種進(jìn)行各種處理，如培養(yǎng)基的靈敏度檢查、無菌檢查及微生物限度檢查方法的驗證、陽性對照、抗生素效價的微生物檢定時菌種及菌懸液制備、轉(zhuǎn)接種等，這些活動要直接處理微生物菌種，在一定條件下，許多種類都是病原菌，因此有關(guān)微生物暴露性操作活動盡可能在生物安全柜內(nèi)進(jìn)行。所有染菌物品、培養(yǎng)物均應(yīng)經(jīng)高壓滅菌處理后再清洗。
（2）無菌檢查及微生物限度檢查中陽性對照菌液加入含供試品的培養(yǎng)基的操作，不能在檢測供試品的無菌室或凈化臺上進(jìn)行，以免污染供試品及操作環(huán)境。可設(shè)置一間陽性接種室進(jìn)行上述操作。以前有的將其設(shè)置為一般環(huán)境；有的根本就未專設(shè)此室。《中國藥典》（2005年版）頒發(fā)后，目前許多人認(rèn)為將其設(shè)置為潔凈度10 000級，設(shè)置單獨的人凈、物凈系統(tǒng)。
3.2無菌室
《中國藥典》要求無菌藥品的無菌性檢查室、非無菌藥品的微生物限度檢查室的環(huán)境潔凈度都為10 000級（局部潔凈度100級），通常都稱為無菌室；若某藥廠既生產(chǎn)無菌藥品，也生產(chǎn)非無菌藥品，為防止非無菌藥品供試品對無菌藥品的無菌性檢查的污染，有兩種方式：
①如果同時進(jìn)行這兩類藥品的檢驗，將這兩種無菌室分開設(shè)置二套，使用各自的人凈、物凈系統(tǒng)。此種方式無菌室利用率不高。
②通常只設(shè)一套無菌室，分期進(jìn)行這兩類藥品的檢驗，合理安排檢驗規(guī)程、嚴(yán)格操作并經(jīng)驗證，確保不對無菌藥品的無菌性檢查產(chǎn)生污染。
3.3隔離系統(tǒng)
《中國藥典》[1]無菌檢查法中被為可使用的設(shè)施，它能提供并保持與外界環(huán)境隔離的百級潔凈度的操作環(huán)境。隔離操作器所處環(huán)境的級別取決于它們的設(shè)計及其應(yīng)用。美國藥典并不要求它安裝在潔凈區(qū)/室，但應(yīng)控制無關(guān)人員進(jìn)入其所處房間；歐盟GMP則建議應(yīng)將它放置于100 000級的環(huán)境中。采用隔離操作技術(shù)能zui大限度降低操作人員和外界環(huán)境對潔凈空間的影響。它既可用于無菌實驗，又可用于其他需要高潔凈度的多種研究和實驗。但隔離操作器的性能與操作程序的驗證尤為重要，隔離用袖管/手套系統(tǒng)應(yīng)進(jìn)行常規(guī)監(jiān)測，這包括經(jīng)常進(jìn)行必要的檢漏試驗。隔離系統(tǒng)的諸多優(yōu)勢如潔凈區(qū)域的隔離化、自動化、小型化等將使其成為無菌區(qū)的發(fā)展未來。
3.4培養(yǎng)室
用來放置培養(yǎng)各類微生物生長的細(xì)菌培養(yǎng)箱和真菌培養(yǎng)箱。大多數(shù)將其設(shè)置為一般環(huán)境；也有的將其潔凈度設(shè)置為100 000級。設(shè)計時根據(jù)藥廠相關(guān)部門的要求進(jìn)行。